| Наименование РИД |
Процедура проведения ДНК-кометного анализа для выявления модифицированных оснований и АР-сайтов в ДНК RU 146952
|
| Реферат |
Метод количественной оценки повреждений ДНК с помощью электрофореза одиночных клетках (метод ДНК-комет) широко используется в области генотоксикологии. Этот краткосрочный тест позволяет выявлять факторы, индуцирующие повреждения ДНК, и изучать эффективность работы систем репарации ДНК на уровне отдельных ядросодержащих клеток. Также метод нашел применение в биомониторинговых и экотоксикологических исследованиях. В основе метода лежит свойство ДНК мигрировать от катода к аноду в электрическом поле, формируя след, визуально напоминающий хвост кометы, параметры которого зависят от степени поврежденности ДНК. Тест ДНК-комет может быть реализован при помощи любого типа клеток млекопитающих, например, лимфоциты человека, CHO, V79, L5178Y, ТК6 и др.
Промышленный образец описывает схему проведения ДНК-кометного анализа с использованием модифицированного протокола, в который включена стадия обработки микропрепаратов ферментами репарации ДНК для выяснения механизмов ДНК-повреждающего эффекта, индуцированного действием неблагоприятного фактора. Обработка ферментами репарации ДНК позволяет распознавать модифицированные основания, которые не выявляются в стандартном протоколе ДНК кометного теста. Наиболее часто применяют ферменты эксцизионной репарации, например, такие как формамидопиридин-ДНК-гликозилаза, эндонуклеаза III, 8-гидроксигуанин-ДНК-гликозилаза, AP-эндонуклеаза др.
Начальные стадии приготовления микропрепаратов в модифицированном формате проводят аналогично классическому протоколу.
После стадии лизиса в протокол метола дополнительно включена стадия обработки микропрепартов раствором ферментов репарации. Для этого микропрепараты отмывают трижды буфером для ферментативных реакций, выдерживая в буфере в течении 5 мин. После удаления излишка жидкости микропрепараты помещают во влажную камеру, наносят 50 мкл фермента в буфере для ферментативных реакций (в разведении 10-2-10-4), накрывают покровным стеклом и инкубируют при 37С в течение 30 мин. Параллельно для сопоставления полученных результатов готовят контрольные микропрепараты, которые обрабатывают буфером для ферментативных реакций без фермента. На окрашенных микропрепаратах оценивают степень миграции ДНК отдельных клеток, например, по показателю «%ДНК в хвосте комет». Полученные результаты сопоставляют с данными для необработанных микропрепаратов, которые прошли те же стадии обработки. Достоверное увеличение показателя «%ДНК в хвосте комет» при обработке ферментами свидетельствует об индукции образования модифицированных оснований, определенного типа или АР-сайтов, при действии фактора.
|
| Возможные направления использования |
выявление агентов, индуцирующих повреждения ДНК
|
| Количество опытных образцов |
1
|
| Количество просмотров |
3
|
| Наличие дополнительных файлов |
False
|
| Использование РИД правообладателем |
False
|
| Внешнее использование РИД |
False
|
| НИОКТР (JSON) |
{}
|
| ИКСИ (JSON) |
[]
|
| ИКСПО (JSON) |
[]
|
| ОЭСР (JSON) |
[]
|
| Дата первого статуса |
2025-07-29T14:00:43.393059+00:00
|
| Предполагаемый тип результата |
Промышленный образец
|
| Ожидаемая роль |
Заказчик и Исполнитель совместно
|
| Заказчик |
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
|
| Руководитель работы |
Ракитский Валерий Николаевич
|
| Руководитель организации |
Кузьмин Сергей Владимирович
|
| Регистрационный номер НИОКТР |
121090800086-7
|
| Последний статус |
Подтверждена, 625110500263-1, 2025-11-05 13:48:29 UTC
|
| ОКПД |
Услуги, связанные с научными исследованиями и экспериментальными разработками в области биологических наук
|
| Ключевые слова |
АР-САЙТЫ; МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ОСНОВАНИЯ; ФЕРМЕНТЫ РЕПАРАЦИИ; МЕТОД «ДНК-КОМЕТ»; ПОВРЕЖДЕНИЯ ДНК; ГЕНОТОКСИЧНОСТЬ
|
| Исполнители |
Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
|
| Авторы |
Аверьянова Наталья Сергеевна; Горенская Ольга Владимировна; Котнова Алина Петровна; Егорова Ольга Валерьевна; Илюшина Наталия Алексеевна
|
| Коды тематических рубрик |
76.33.33 - Коммунальная гигиена и гигиена окружающей среды; 34.23.21 - Мутагены
|
| OESR |
Общественное здравоохранение, гигиена окружающей среды; Генетика и наследственность (медицинская генетика относится к разделу 3)
|
| Приоритеты научно-технического развития |
г) переход к высокопродуктивному и экологически чистому агро- и аквахозяйству, разработку и внедрение систем рационального применения средств химической и биологической защиты сельскохозяйственных растений и животных, хранение и эффективную переработку сельскохозяйственной продукции, создание безопасных и качественных, в том числе функциональных, продуктов питания;; в) переход к персонализированной, предиктивной и профилактической медицине, высокотехнологичному здравоохранению и технологиям здоровьесбережения, в том числе за счет рационального применения лекарственных препаратов (прежде всего антибактериальных) и использования генетических данных и технологий;
|
