| Аннотация |
Участники проекта имеют многолетний опыт проведения молекулярно-генетических исследований, работы с
клеточными моделями, и проведения исследований на иммунодефицитных животных.
Сотрудниками лаборатории генетики стволовых клеток ФГБНУ «МГНЦ» под руководством проф., д.б.н. Д.В.
Гольдштейна были отработаны протоколы получения и культивирования различных клеточных культур:
мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК), индуцированных плюрипотентных стволовых
клеток (ИПСК) человека, NK-92 линии, нескольких линий множественной миеломы человека (RPMI 8226, U226B1,
KMS-12PE и MOLP-8).
Экзосомы. У исполнителей проекта имеется значительный опыт и необходимое оборудование для выделения
и характеристики экзосом, а также их дальнейшего применения для терапии различных социально-значимых
заболеваний. Сотрудниками Лаборатории генетики стволовых клеток был отработан протокол получения
внеклеточных везикул, который позволяет получать образцы с преобладающей фракцией экзосом. Имеется
опыт характеристики внеклеточных везикул с помощью методов электронной микроскопии, глубокого
секвенирования, Вестерн Блоттинга, протеомного анализа и количественного анализа частиц. Кроме того,
было продемонстрировано нейропротективное действие внеклеточных везикул (экзосом) глиальных клеток на
модели глутаматной эксайтотоксичности. Добавление внеклеточных везикул (экзосом) достоверно повышало
выживаемость кортикальных нейронов, что сопровождалось снижением уровня внутриклеточного кальция и
стабилизацией митохондрионального потенциала. При этом терапия на основе внеклеточных везикул
глиальных клеток улучшала функциональное состояние животных после черепно-мозговой травмы.
Адоптивная иммунотерапия. NK-клетки. В отделении клинической иммунологии МРНЦ им. А.Ф. Цыба - филиал
ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России под руководством д.б.н. Гривцовой Л.Ю. ведутся работы по
исследованию и разработке иммунотерапевтических подходов с применением клеточных продуктов и их
производных и, в частности, терапевтического потенциала препарата на основе цитокин-активированных
лимфоцитов. Исследования отдела изложены в публикациях в медицинских журналах. За период с 2019 года
по настоящее время по тематике, касающейся иммунотерапии в целом представлено 64 публикации и
зарегистрировано 17 патентов на изобретение и полезных баз данных, в том числе по изучению множественной
миеломы.
В результате проведенной подготовительной
работы созданы условия для разработки и внедрения методов адоптивной иммунотерапии (АИТ) для лечения
онкологических больных. Были отработаны методы экспансии цитокин-активированных лимфоцитов и NK-
клеток in vitro с применением различной комбинации цитокинов, определены наиболее оптимальные условия
для активации NK-клеток. Разработана методика экспансии NK-клеток с применением фидерного слоя (K562)
(Гельм Юлия Витальевна, Гривцова Людмила Юрьевна, Пасова Ирина Алексеевна, Константинова Татьяна
Викторовна, Иванов Сергей Анатольевич, Каприн Андрей Дмитриевич «Способ экспансии NK-клеток человека
с помощью фидерных клеток». Патент на изобретение №2781777 от 18 октября 2022 г).
С 2013 г. по настоящее время в рамках научных протоколов проводится АИТ цитокин-активированными
лимфоцитами и NK-клетками. В настоящее время АИТ с применением комплексного клеточного препарата NK-
клеток проведена/проводится по запатентованной в центре методике 391 пациенту с морфологически
подтвержденным диагнозом злокачественного новообразования (меланома кожи, злокачественные опухоли
ЖКТ, рак молочной железы, почечно-клеточный рак, рак легкого). Опыт МРНЦ продемонстрировал
безопасность данного вида сопроводительной иммунотерапии и отсутствие побочных и нежелательных
явлений как во время проведения курсов АИТ так и в отдаленные сроки наблюдения. Установлен факт
позитивного влияния АИТ на переносимость химиолучевого лечения и улучшение качества жизни
онкологического пациента. Получены данные, позволяющие рассчитывать и на противоопухолевый эффект
данной терапии.
Накоплен большой опыт по оценке дисбаланса иммунитета и функционального состояния иммунной системы у
больных с различными злокачественными новообразованиями. Охарактеризованы субпопуляционный состав и
активационные фенотипы лимфоцитов крови больных злокачественными новообразованиями абдоминальной
области, меланомой и раком почки и опухолями кроветворной системы. Показано, что для онкологических
больных характерно повышение относительного и абсолютного содержания Тreg и альфа цепи рецептора IL-2
(CD25) на лимфоцитах крови. Общепринятая панель маркеров лимфоцитов из 6-8 показателей дополнена
маркерами активации (CD25, CD314, CD38, HLA-DR, CD95) и малыми субпопуляциями лимфоцитов (NKT, Treg,
активированные NK- и T-клетки), выявлено увеличение поверхностной экспрессии как ранних, так поздних
активационных молекул, а также маркера апоптоза лимфоцитов, что свидетельствует в пользу хронического
напряжения иммунитета у онкологических больных различных нозологических групп. Имеется существенный
опыт по оценке иммунолгических показателей методом проточной цитометрии.
Разработаны методы культивирования и оценки функционального состояния различных субпопуляций
стволовых клеток (как гемопоэтических так и мезенхимальных) выделенных из костного мозга человека.
Генная инженерия. Заведующий лабораторией экспериментальной генной терапии наследственных
болезней обмена веществ в ФГБНУ «МГНЦ» к.м.н. Бычков И.О. имеет большой многолетний опыт сборки
плазмидных векторов. В лаборатории отработаны методы трансдукции NK-92 клеток лентивирусными
векторами, несущими репортерный ген GFP.
|
